【摘要】 目的 建立猪冠状动脉再狭窄模型，并用血管内超声（IVUS）进行评价。方法 选择健康小型猪9头，在左前降支中段植入金属裸支架［支架/血管直径=（1.1～1.2）/1.0］，术后第28天复查造影、IVUS，并行组织形态学检查观察再狭窄情况。 结果 4头猪在支架植入2 h内死亡，5头猪完成28 d复查，定量冠脉造影（QCA）示支架植入后血管直径为 （2.90±0.26） mm，比植入前基础血管直径［（2.52±0.31）mm］明显增大（ P =0.001）;随访期血管直径［（1.20±0.77）mm］较植入后血管直径明显减小（ P =0.002），直径狭窄百分比为（60.2±23.5）%，支架内再狭窄率为60%。组织形态学检查 示管腔面积与支架内面积相比明显减小［（1.29±1.02）mm 2vs（6.04±1.21）mm2，P <0.01］，平均面积狭窄百分比为（77.9±19.7）%。IVUS检查结果类似［管腔面积（1.67±1.17）mm2vs（5.85± 0.94）mm
2 ，P <0.01］;平均面积狭窄百分比为 （71.0±23.3）%。两种检查手段测得的支架内面积、管腔面积、新生内膜面积和平均面积狭窄百分比相比差异无统计学意义 （ P >0.05） 。结论 成功建立猪冠状动脉再狭窄模型，IVUS检查可作为猪冠脉再狭窄模型支架内再狭窄的评价手段。
【关键词】 冠状动脉模型;血管再狭窄;血管内超声;新生内膜;猪
经皮腔内冠状动脉成形术（PTCA）和支架植入术的临床应用极大地改善了冠心病患者的预后，但10%～ 50%的再狭窄率限制了PTCA和支架植入术的发展。本研究以小型猪冠状动脉植入较大直径支架建立再狭窄模型，并通过血管内超声（IVUS）进行评价。
1 材料和方法
1.1 动物选择和材料准备
健康小型猪9头，体重30～40 kg，月龄6～9个月，雌雄不限，整个实验期间予普通谷物饲养。维科医疗器械有限公司提供的金属裸支架9枚，均为管状，直径2.5～3.0 mm，长15～20 mm。小鼠抗增殖细胞核抗原（PCNA）抗体（clone PC10，DAKO）浓缩液和抗体稀释液由北京中杉金桥生物技术有限公司提供。
1.2 支架植入方法
术前日喂饲拜阿司匹林300 mg、波立维225 mg。禁食禁水12 h，予氯胺酮（12mg·kg-1）肌注基础麻醉，3%戊巴比妥钠20 mg · kg-1术前和术中间断静注强化麻醉。用外科手术方法暴露颈动脉或股动脉，置6F鞘管，注入肝素150～200 U · kg-1，行定量冠状动脉造影 （QCA）并在左前降支中段植入金属裸支架1枚［支架/ 血管=（1.1～ 1.2）/1.0］，扩张压为10～15 atm （1 atm= 101.325 kPa），每次30 s，两次扩张间隔1 min。15 min 后复查QCA证实管腔通畅，无充盈缺 损、管壁夹层和支架移位。行IVUS检查（JOMED Viewsonic PF 775）证实支架贴壁良好。术毕结扎动脉，青霉素480万U · d-1肌注3 d预防感染;波立维75mg·d-1喂饲28 d;拜阿司匹林300 mg·d-1 喂饲7 d后改为100 mg·d-1喂饲21d，共28 d。
1.3 QCA和IVUS复查
术后28 d行QCA和IVUS检查观察再狭窄情况。随访期QCA测定血管参考直径，在支架段血管近 端、中间、远端测定后取平均值。 平均直径狭窄百分比（%）=（1-随访期血管参考直径/植入后直径）×100。IVUS检查测定支架内面积、管腔面积;新生内膜面积= 支架内面积-管腔面积;面积狭窄百分比（%）=（1-管 腔面积/支架内面积）×100。
1.4 组织形态学检查和免疫组化
QCA和IVUS复查后予10%氯化钾静注处死动物，分离心脏，10%中性缓冲福尔马林液从主动脉残端以100 mmHg（1 mmHg = 0.133 kPa ）压力灌注固定30 min。分离含支架血管段，从支架正中横切，近段标本以10%中性福尔马林固定24 h，送至上海中山医院 心脏病研究所制成100 μm厚切片并行HE染色。计算支架内面积、管腔面积、新生内膜面积和狭窄面积百分比。冠脉损伤程度根据Schwartz等的方法计算损伤评分。远段标本移去支架丝，切片行PCNA染色，通过计算机辅助系统放大400倍在新生内膜中随机取 5块0.1 mm2大小区域计算平滑肌细胞密度（SMCs），通过计算PCNA阳性SMCs占总SMCs的比例得出 增殖SMCs比值。
2 统计学分析
计量资料以 x-±s 表示，用SPSS 11.5统计软件行t 检验， P <0.05差异有统计学意义，P <0.01差异有 非常显著性意义。
3 结 果
9头小型猪均成功在前降支中段植入金属裸支架，其中4头在支架植入后2 h内死亡，死因分别为急性心包压塞、大出血和麻醉意外。死亡后即刻分离支架血管段，小心抽去支架丝，HE染色光镜下见支架段 血管内弹力膜剥脱，中膜压缩，局部较多炎症细胞聚集（图1）。支架近端血管和远端血管管壁正常，偶见少数 炎症细胞局部聚集。其余5头猪安全存活至试验期结束，复查QCA示支架植入后血管直径为（2.90±0.26）mm，比植入前基础血管直径［（2.52±0.31）mm］明显 增大（P =0.001），支架/血管比为1.13±0.02;随访期血管直径（1.20±0.77）mm，较植入后血管直径明显减小（ P =0.002），直径狭窄百分比为（60.2± 23.5）%，支架内再狭窄率为60%，成功建立猪冠状动脉再狭窄 模型。IVUS和组织形态学检查结果见表1和图2，两种检查手段测得的支架内面积、管腔面积、新生内膜面积、平均面积狭窄百分比比较差异无统计学意义，提示IVUS可替代组织形态学检查来定量评价支架内再狭窄情况;管腔面积与支架内面积相比均明显减小，提示新生内膜增生明显。 表1 术后28 d IVUS和组织形态学检查结果比较（略）
4 讨 论
近年来的研究表明，PTCA术后再狭窄的机制主要是新生内膜增生、血栓形成、血管重构和血管的弹性回缩［1-2］。支架的应用消除了血管重构和血管弹性回缩，但并未阻止甚至促进了以平滑肌增殖和迁移为特征的新生内膜增生。以往曾 1 2 3 下一页
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