【关键词】 骨肉瘤
Establishment of human osteosarcoma cell sublines with different potential of metastasis and studies on their biological characteristics
【Abstract】 AIM: To get human osteosarcoma cell subclones with different potential of metastasis. METHODS: We got different monocell clones by the limited dilution method from the human osteosarcoma cell line SOSP9607. After preliminary screening by in vitro invasion assay, we selected two cell lines as high metastasis potential cell subclones and three cell subclones as low metastasis potential cell subclones. We inoculated these subclones into nude mice for three circles and obtained different metastatic potential subclones. We then inspected their different biological properties by tests of cell growth curve assay, chromosome number, soft agar cloning technique, flow cytometry and auto metastasis in nude mice. RESULTS: We got the two subclones with the different metastasis potential: low potential subclone H9 and high potential subclone E10. They had the same hypotriploid karyotype with human chromosome morphology. E10 had faster growth speed than H9 and the artificial lung metastasis rate of H9 and E10 in nude mice was 10% and 100%, respectively. The rate of S phase cell cycle was respectively 16.8% and 21.0%. CONCLUSION: These two subclones come from the same mother cell line and their difference mainly lies in the different metastatic phenotype. This study will help the screening of metastasis correlated gene, the study of the metastatic mechanism and clinical study of osteosarcoma.
【Keywords】 osteosarcoma；neoplasm metastasis；cell subclone；biological specialties
【摘要】 目的：获得不同转移潜能的骨肉瘤细胞株. 方法：从我室建立的人成骨肉瘤细胞系SOSP9607中通过有限稀释法获得不同的单细胞克隆，经过侵袭试验初筛后获得5株转移潜能不同的细胞株，再通过裸鼠体内连续传代法筛选出具有不同转移能力的细胞系.并利用细胞生长曲线测定，软琼脂克隆形成试验，流式细胞仪，裸鼠体内自发转移试验分析了他们的生物学性质. 结果：获得两株转移潜能不同的骨肉瘤细胞株.其中,H9为具有低转移潜能的骨肉瘤细胞株, E10为具有高转移潜能的骨肉瘤细胞株，其染色体众数分布特征与母系SOSP9607基本相似，保持人类染色体核型；所至皮下移植瘤及肺转移瘤均符合人成骨肉瘤组织学特征，它们具有差异明显的体外生长速度，软琼脂克隆形成率H9（22±5）明显高于E10(98±12) ，裸鼠体内试验性自发肺转移率分别为10%和100%，流式细胞仪测定H9和E10的S期细胞分别为16.8%和21.0%. 结论：这两株细胞株来源于同一亲本，他们之间的差异集中在转移表型上，为今后利用分子生物学的方法筛选出转移相关基因从而为成骨肉瘤的转移机制及临床研究奠定基础.
【关键词】 骨肉瘤；肿瘤转移；细胞株；生物学特性
0引言
肿瘤转移是一系列步骤组成的，包括侵袭周围组织，延血管或淋巴管运行、在靶器官上增殖等.自Fidler［1］提出肿瘤转移异质性概念后，国内外已相继有一些实验室建立了黑色素瘤，前列腺癌，肺癌的不同转移潜能的细胞亚系［2-4］.但从人骨肉瘤细胞中分离出具有不同转移潜能的肿瘤转移亚群的报道却不多见，这在一定程度上限制了对骨肿瘤转移机制的深入研究.为了在分子水平对其进行比较研究，获得具有相同的遗传背景不同转移潜能的肿瘤细胞株十分重要.
1材料和方法
1.1材料
成骨肉瘤细胞系SOSP9607细胞系由第四军医大学唐都医院全军骨肿瘤研究所实验室建立；RPMI 1640(Gibco, USA),胰蛋白酶（华美生物工程公司）；胎牛血清与小牛血清（兰州民海生物制品公司）；细胞培养瓶与细胞培养板（Nunc，USA）；基底膜胶（北京大学医学部细胞中心）；侵袭小室（Milipore PI8P01250，USA）；流式细胞仪（第四军医大学免疫教研室提供）；BALB/cnu/nu裸小鼠（上海思莱克动物试验有限公司）；琼脂（Spain 兰州民海生物制品公司）.
1.2方法
1.2.1SOSP9607的克隆化分离培养SOSP9607骨肉瘤细胞至对数生长期，用2.5 g/L胰酶消化，倒置显微镜下记数，梯度稀释至4.6 mL含230个细胞（每0.1 mL含5个细胞），加入96孔板前36个孔，每孔0.1 mL.还剩1.0 mL，加培养基至5 mL（每0.1 mL含1个细胞）再加入相邻的36孔，每孔0.1 mL.剩余1.4 mL，再加培养基至终体积2.8 mL，（每0.1 mL含0.5个细胞）加入剩余的24孔，每孔0.1 mL.放入培养箱中，在37℃，50 mL/L C 1 2 3 下一页
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