【关键词】 ,外周血单核细胞
Activation of NFκB induced by coronary stent placement in peripheral blood mononuclear cells
【Abstract】 AIM: To investigate the effect of coronary stenting on the activation of NFκB in peripheral blood mononuclear cells (PBMC). METHODS: Fifty patients were classified into two groups: 28 patients in stenttreatment group and 22 in coronary angiography (CAG). The levels of NFκB activity preprocedural and during the days after stent placement were determined using electrophoresis mobility shift assay (EMSA). RESULTS: The levels of NFκB activity in stenttreatment group from preprocedural to the 4th hour, 1st, 2nd and 3rd days after stent placement were (1.17±0.25) fold, (1.23±0.30) fold, (2.00±0.45) (2.49±0.46) fold and (2.25±0.4) fold respectively. Significantly increased levels of NFκB activity were seen in the 1st, 2nd and 3rd days (P<0.05). No alteration of NFκB activity was seen in CAG group. CONCLUSION: Increased level of NFκB activation in PBMC may be involved in the stent injury of the targeted vessel wall.
【Keywords】 peripheral blood mononuclear cells; NFkappa B; stents
【摘要】 目的： 探讨经皮冠状动脉内支架植入术是否激活外周血单核细胞(PBMCs)中核因子κB (NFκB)活性的表达. 方法： 选择NFκB基线时呈阴性反应的稳定型心绞痛患者50例，其中单纯造影组22例，支架治疗组28例. 分别于冠脉造影或支架术后4 h及术后第1， 2， 3 d留取全血抗凝标本；采用凝胶电泳迁移率实验(EMSA)测定PBMCs 中NFκB的活性. 结果： 支架术程中NFκB活性呈动态变化，于术后1 d NFκB活性显著性升高呈阳性反应，术后2 d NFκB活性达峰值，术后3 d NFκB活性有下降，但仍保持在高水平表达状态. 而造影组患者则没有NFκB活性变化. 结论： 冠状动脉内支架术激活外周血单核细胞NFκB活性.
【关键词】 外周血单核细胞；NFκB；支架
0引言
经皮冠状动脉介入治疗(percutaneous coronary intervention, PCI)能迅速开通罪犯血管，恢复心肌供血、挽救心肌、挽救生命；但对于不同病例仍有30%~50%的再狭窄率［1］. 病理研究发现支架内再狭窄发生率与PCI术后靶血管处异常增多的炎症介质和炎细胞浸润相关［2］. 而细胞因子、趋化因子等炎症介质的合成、分泌受核因子κB (NFκB)等转录因子调控［3］. 因而了解PCI术程中NFκB的活性变化，可能对阐明PCI的炎症机制具重要意义. 为此，我们探讨了冠状动脉内支架术血管急性损伤期周围血单核细胞(PBMC) NFκB的活性变化.
1对象和方法
1.1对象
选择在我院冠心病诊治中心行冠状动脉造影术或支架术的稳定型心绞痛患者50例. 按是否行冠状动脉内支架植入术分为支架治疗组和单纯造影组. 所有患者于冠状动脉造影术前NFκB 活性测定呈阴性. 排除标准： ① 急性心肌梗死、不稳定性心绞痛伴肌钙蛋白水平升高；② 严重的心脏瓣膜疾病及风湿、类风湿活动；③ 心肌炎，心肌病，明显的肝脏和肾脏疾病伴肝或肾功能不全；④ 近期感染性疾病.
1.2方法
1.2.1冠状动脉造影和支架术采用Judkins法经右股动脉按常规方法进行. 术前24 h口服氯吡格雷（波立维）300 mg. 支架术前即刻静脉推注或股动脉套管内注射肝素6000～8000 U(按公斤体质量计算)；本研究中所有患者均经球囊预扩张后植入支架. 手术成功标准：残余狭窄＜30%，TIMI 3级.
1.2.2血液标本收集分别于冠状动脉造影和支架术术前，术后即刻，4 h，1， 2， 3 d留取全血抗凝标本，进行PBMC提取.
1.2.3PBMC NFκB活性测定
1.2.3.1主要试剂［γ32P］ ATP放射性摩尔活度: 185 PBq/mol，体积活度370 GBq/L，2 wk内完成实验(北京亚辉生物医学工程公司). 凝胶电泳迁移率实验试剂盒(Gel shift assay core system)，NFκB consensus oligo及T4多核苷酸激酶(Promega公司提供).
1.2.3.2核蛋白提取及浓度测定参照Schreiber等［4］方法. 简述如下：初步提取的PBMCs 经PBS洗涤后，加缓冲液A(buffer A)，冰上静置20 min，加入NP40裂解离心，取沉淀再加缓冲液C(buffer C)悬浮混匀，高速离心收集上清液中的核蛋白并进行蛋白浓度测定.
1.2.3.3凝胶电泳迁移率实验 (EMSA)① 在T4激酶作用下，37℃将［γ32P］ATP标记于NFκB寡核苷酸上；② 加入核蛋白提取物(10 g/L)室温20℃下孵育20 min；③ 40 g/L非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳约2 h；④ -70℃X光片增感屏放射自显影36 h.
1.2.3.4半定量分析凝胶图像扫描系统对显影照片进行光密度扫描，以arbitrary units(AU)表示结果. AU=实验组/空白对照组光密度. 本实验以>2AU判定为阳性结果，否则为阴性结果.
1.2.4cTnI水平测 1 2 下一页
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